細胞生長速度變慢或細胞形态變差的原因較為(wèi)複雜，可(kě)從細胞，細胞培養液，污染，操作(zuò)等方面去分析。比如：細胞衰老、細胞代次過高(gāo)、細胞被胰酶消化過度，細胞培養液配制(zhì)或儲存不當，支原體(tǐ)污染，細胞接種密度低(dī)，溫度/CO₂濃度/pH等生化條件變化方面去分析，也需要考慮到血清是否有(yǒu)更換，血清來(lái)源不可(kě)靠，質量不穩定均會(huì)導緻細胞狀态出現變化。

細胞馴化過程是細胞優勝劣汰，适者生存的過程，狀态不好或者死亡的細胞特别容易結團。在馴化過程中可(kě)以采用低(dī)速離心，自然沉降，胰酶消化，添加硫酸葡聚糖等方法逐步去除較大(dà)的細胞結團，不斷傳代馴化。另外，細胞出現結團與細胞培養基是否适應，與Ca ²⁺，Mg ²⁺離子濃度，種子細胞質量等有(yǒu)較大(dà)關系。

丙酮酸鈉可(kě)作(zuò)為(wèi)替代碳源。盡管細胞傾向于以葡萄糖作(zuò)為(wèi)碳源，但(dàn)是在沒有(yǒu)葡萄糖時(shí)，細胞可(kě)以代謝丙酮酸鈉。

不添加生長因子。

內(nèi)毒素的控制(zhì)必須從培養基配方開(kāi)發到最終生産進行(xíng)全程監控。配方開(kāi)發時(shí)動物源性蛋白的選擇與否、各類原材料的供應商篩選、生産車(chē)間(jiān)淨化級别、生産設備和器(qì)具的消毒、物料幹燥、生産過程控制(zhì)、人(rén)員操作(zuò)規範等全過程控制(zhì)內(nèi)毒素，嚴格執行(xíng) GMP 管理(lǐ)制(zhì)度，生産高(gāo)質量培養基。

對于大(dà)部分昆蟲細胞，pH 在 6.0-6.4 範圍效果較好，最适滲透壓在 345-380mOsm/kg。

（1）這是邊緣效應的體(tǐ)現，細胞工廠面積稍大(dà)，會(huì)有(yǒu)受熱不勻的情況，可(kě)以提前在工廠中加入培養液放置溫箱預熱好，現象會(huì)有(yǒu)所改善。

（2）目前我們的細胞工廠用的是普通(tōng)材質的，較cell bind處理(lǐ)過的細胞貼壁生長效果會(huì)稍差一些(xiē)，一般就使用一次，邊緣有(yǒu)少(shǎo)星細胞脫落影(yǐng)響不是很(hěn)大(dà)。

建議2-3代，從複蘇時(shí)的10%NBS逐步降為(wèi)無血清培養。

天信和630培養基所培養的Vero無血清細胞形态與進口培養基有(yǒu)一定區(qū)别，主要因為(wèi)兩種培養基成分差異及天信和630培養基的冰點滲透壓高(gāo)于進口培養基20%，但(dàn)并不影(yǐng)響細胞生長與後期接毒，且天信和630培養基培養Vero細胞生長速率高(gāo)于進口培養基，宿主細胞DNA、宿主細胞蛋白含量等明(míng)顯低(dī)于進口培養基，有(yǒu)明(míng)顯的優勢，目前暫時(shí)不做(zuò)調整。

低(dī)密度接種，稍微延長培養時(shí)間(jiān)，細胞也可(kě)生長至緻密，但(dàn)暫未嘗試低(dī)密度連續傳代，目前天信和推薦稍高(gāo)密度接種，更有(yǒu)利于細胞狀态與增殖速度的保持。

細胞具體(tǐ)生長密度和細胞來(lái)源、細胞狀态、接種密度、培養基、環境控制(zhì)有(yǒu)關，沒有(yǒu)比較固定的數量。但(dàn)确定了具體(tǐ)細胞、培養基、培養條件，細胞每代數據應平行(xíng)。

根據廠家(jiā)提供培養基使用說明(míng)就能保證培養基安全有(yǒu)效。血清即可(kě)過濾前添加也可(kě)過濾後添加，具體(tǐ)根據無菌控制(zhì)要求操作(zuò)。

細胞工廠為(wèi)一次性使用産品，不建議重複使用。如需反複使用，接毒後有(yǒu)大(dà)量完整細胞殘留，可(kě)用胰酶消化後PBS沖洗幹淨輻照滅菌繼續使用；接毒後細胞破碎，可(kě)用堿液浸泡後PBS清洗幹淨輻照滅菌繼續使用。

細胞消化時(shí)需要注意胰酶添加量控制(zhì)，保證每1層細胞工廠有(yǒu)适量胰酶流入。胰酶作(zuò)用消化時(shí)，密切關注細胞脫落變化情況，及時(shí)終止消化。如有(yǒu)輕微結團可(kě)在消化終止後用力搖晃細胞工廠的細胞懸液數次。